培養(yǎng)基選擇：

LB培養(yǎng)基(種子培養(yǎng)基) :胰蛋白胨5g,酵母粉2.5g,NaCl5g,溶于500mlH2O,NaOH調(diào)節(jié)pH7.0, 2L三角瓶裝,滅菌鍋濕熱高壓滅菌121℃, 20min,室溫保存.  

TB培養(yǎng)基(發(fā)酵培養(yǎng)基) : 胰蛋白胨240g, 酵母粉480g, 甘油80g,消泡劑1ml, 溶于H2O, 定容至19L,B. Braun發(fā)酵罐在位滅菌121℃, 15min.

配制種子固體培養(yǎng)基：100mL，分裝試管，0.1MPa 滅菌20min，然后擺成斜面。

配制種子培養(yǎng)液：1200mL，分裝平均分裝于三個(gè)500mL三角瓶中，同上滅菌。

培養(yǎng)方式：

  大腸桿菌發(fā)酵大多采用補(bǔ)料分批培養(yǎng)，這是在現(xiàn)代發(fā)酵工藝得到優(yōu)化的一種方式，能有效的優(yōu)化微生物培養(yǎng)過(guò)程中的化學(xué)環(huán)境。使微生物處于最佳的生長(zhǎng)環(huán)境。這種方式一方面可以避免某些營(yíng)養(yǎng)成分初始濃度過(guò)高出現(xiàn)底物抑制現(xiàn)象，另一方面能夠防止限制性營(yíng)養(yǎng)成分被耗盡而影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和產(chǎn)物的形成。補(bǔ)料分批培養(yǎng)已廣泛應(yīng)用于各種各樣的初級(jí)、次級(jí)生物產(chǎn)品和蛋白等的發(fā)酵生產(chǎn)中。

    培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分過(guò)高會(huì)抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)，采用流加補(bǔ)料是提高細(xì)胞濃度和外源蛋白產(chǎn)量的有效方式，高密度培養(yǎng)通過(guò)調(diào)節(jié)限制性底物的流加速率來(lái)調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)。

培養(yǎng)條件：

1、溫度：36~38 ℃

2、pH： 7

3、攪拌速率：100~200r/min

4、溶氧:   20~50%

5、通風(fēng)：1:2VVM

6、接種量：1~2%

操作步驟：

1、菌種準(zhǔn)備

2、上罐前的準(zhǔn)備及實(shí)罐滅菌

3、發(fā)酵操作

4、發(fā)酵管理

5、發(fā)酵過(guò)程中各生化指標(biāo)的測(cè)定

6、補(bǔ)料

7、放罐

8、清洗